細(xì)胞培養(yǎng)的條件一般離不開這5個(gè)：合適的細(xì)胞培養(yǎng)基、優(yōu)質(zhì)血清、無(wú)菌無(wú)毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境、恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)溫度、合適的氣體環(huán)境

　　絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。

　　不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成*分離細(xì)胞，這是沒(méi)有必要的。一般能移動(dòng)了，說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了（雖然沒(méi)有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

　　細(xì)胞就是*成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性，無(wú)論死活的細(xì)胞都是如此，你可以嘗試，準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過(guò)幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液（不要笑，這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開）。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái)，這個(gè)時(shí)候即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過(guò)20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個(gè)細(xì)胞左右），是正常的，不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間，或者象有的同學(xué)那樣吹打1h，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。

　　比較難消化的細(xì)胞（潤(rùn)洗方法5min還不能消化），就以coloncancer為例，比如HCT15,LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mmdish，一次多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過(guò)5min，即可見細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。